CAR-T细胞疗法的呈现是医学史上一个宏大的创新，救助了有数人的生命，并为许多疾病的治愈提供了能够，是目前肿瘤医治范畴最具前景的开展方向之一。但是高额的本钱和高度可变的制造进程是其能否普遍推行的关键，因而CAR-T细胞的消费工艺遭到了极大的关注。
近日，一个宾大的研讨团队在美国血液学学会会议发布了一份研讨摘要，宣布其可在短短24小时内发生功用性CD19特异性CAR-T细胞。这是继亘喜生物宣布将 CAR-T 制造工夫从两周延长至一天后的又一技术改造。
传统CAR-T细胞制造办法
在目前的细胞医治开发进程中，虽然CAR-T细胞的消费经过各种制造办法停止，但一切制造办法都包括相反的共同步骤。
首先，经过白细胞别离术别离患者的白细胞并洗濯。然后，激活T细胞，用CAR转基因转导，扩增至所需的细胞数量用于医治，制剂消费和灌装。在对患者停止质量控制测试和预备性淋巴肃清化学疗法后，将产品注射到患者体内。
白细胞别离术和细胞洗濯。T细胞疗法开端于经过白细胞别离法取得患者的WBC，这是一种将白细胞与全血别离的单采血液成分术。通常采用延续或许半延续的密度梯度离心办法。在别离进程中添加的抗凝剂，红细胞和血小板在洗濯进程中会被肃清。抗凝剂在活化的进程中可以改动细胞的特征，红细胞会影响产品的临床效果，血小板会招致细胞的聚集。洗濯后，直接运用WBCs或许WBCs经顺序降温冷冻保管。富集和细胞。一些研讨人员运用CliniMACS零碎对细胞停止富集和洗濯，其中相应的抗体与顺磁珠衔接。FredHutchinson Cancer研讨中心和西雅图儿童医院为CD4＋和CD8+细胞富集WBC，以便输出具有确定的CD8+/CD4+细胞比例的产品。相似的，Brown等富集搜集CD62L+细胞。MDAnderson癌症中心发现NK细胞会障碍T细胞的培育。当NK细胞超越10%时，运用CD56+磁珠可以去除NK细胞。拉莫斯等人在具有> 95％循环白血病细胞的两名患者中停止CD3 +选择，以使得可以从含有低百分比的T细胞的单采血液成分产物中扩增。活化。在体内，经过抗原呈递细胞，例如树突细胞安慰自然T细胞的增殖和分化。T细胞经过T细胞受体与位于DC细胞外表的次要组织相容性复合物之间的互相作用以及经过共安慰分子激活。为了防止与DC共培育繁琐的进程，曾经开发并施行了几种模仿T细胞自然安慰的办法。最根本的办法是参加OKT3和白细胞介素。基因递送。基因递送可以分为病毒和非病毒的办法。在CAR-T细胞医治中，包括电转DNA，转座子零碎以及病毒载体，尤其是慢病毒或逆转录病毒转染。病毒转导是最罕见的基因递送办法。扩增。在目前的细胞培育进程中，通常添加培育基体积；通常经过添加袋子或烧瓶的尺寸或经过从板到烧瓶，烧瓶到静态培育袋或静态培育袋换成RM生物反响器。
目前，在一切CAR-T研讨机构中，宾夕法尼亚大学承受了大少数的患者；细胞的靶点通常是CD19，来源产品次要是自体T细胞；大少数CAR-T细胞产品的制造工夫在20天内；CAR-T细胞疗法次要用于医治血液零碎恶性肿瘤。
一天内消费CAR-T细胞
CAR-T细胞疗法的疗效取决于过继转移后T细胞的植入和耐久性。植入和耐久性的潜力与T细胞分化的形态有关，宾大团队此前曾经证明增加离体培育的继续工夫将限制T细胞分化并进步CAR-T细胞疗法的疗效。但是大少数实验方案通常先经过TCR和共安慰受体的结合激活T细胞，然后将T细胞离体扩增9到14天，这关于CAR-T细胞疗法的疗效发生了一定的影响。
于近期宣布在ASH年会上的研讨摘要，宾大团队描绘了运用慢病毒载体可在一天内发生功用性CD19特异性CAR-T细胞，而无需事前激活T细胞，。该摘要显示了运用非优化进程，可以运用表达红外白色荧光蛋白的慢病毒载体转导均匀6.5％的新颖别离的静态T细胞，与活化的T细胞转导相比，表达动力学更慢。虽然与活化的T细胞相比效率低得多，但在一切T细胞亚群中检测，其地方记忆T细胞显示出最大的转导效率；与未处置的T细胞相比，均匀转导率高4倍。
宾大团队证明了即便没有逆转录或整合酶功用，CAR表达也可以在静态的T细胞中发作，即所谓的“伪转导”。重要的是，宾大团队证明了该表达发生的CAR-T细胞具有溶细胞活性和效应细胞因子，对立原的反响相似于激活和转导的CAR-T细胞。
该研讨团队运用公认的急性淋巴母细胞白血病Nalm6模型停止实验，发现由静态T细胞转导16小时后洗濯去除载体发生的CART19细胞表现出剂量依赖性的抗白血病活性，该活性只需注射小剂量即可耐久2x10^5个T细胞。
该研讨的通讯作者Michael Milone是宾夕法尼亚大学医院和医学院的病理学和检验医学副教授。他于1999年重新泽西州的医学和牙科大学取得医学博士学位；在宾夕法尼亚大学持续承受外科，实验室医学和输血医学的研讨生医学培训；在博士后研讨时期持续迷信研讨；曾与宾大的Carl June博士一同停止过癌症免疫医治，这项任务招致了对B细胞白血病和淋巴瘤患者的人工抗原受体的开放式I期研讨。
国际相关停顿
此前，免疫细胞疗法公司亘喜生物科技集团无限公司宣布成功开发了新型FasT CAR-T消费平台，该技术可将CAR-T制造工夫从两周延长至一天。同时，体内和体外研讨显示，CD19靶向 FasT CAR-T (“CD19-F-CAR-T") 对B细胞急性淋巴细胞白血病 (B-ALL) 和非霍奇金淋巴瘤 (NHL) 均具有更高的疗效。
与传统CAR-T疗法 (C-CAR-T)相比，FasT CAR-T大大延长了制造工夫，降低了制形成本。FasT CAR-T只需求1天的消费工夫，而C-CAR-T消费普通需求大约两周工夫，再加上7天的检测工夫，因而，FasT CAR-T可以提早约12天的工夫回输给患者。这关于病情停顿迅速的患者来说是至关重要的。
亘喜生物也将于ASH会议上发布关于应用该消费平台消费的CAR-T细胞医治复发和难治性多发性骨髓瘤和复发/难治性急性淋巴细胞白血病的研讨数据。
结语
该研讨团队应用慢病毒载体将基因转移到静态T细胞的才能，描绘的高度简化的制造办法具有加强医治效能的潜力，同时还大大降低了本钱。此外，这种制造办法还能够扩展承受疗法的患者数量。
该研讨团队将于12月9日的ASH会议上发布更多的数据，而我们等待着更多令人冲动的数据。
参考来源：
1.https://ash.confex.com/ash/2019/webprogram/Paper131147.html
2.https://discovery.ucl.ac.uk/id/eprint/10050033/1/Veraitch_20180109_CAR%20T%20cell%20manufacturing%20Review%20-%20Revision.pdf
3.https://www.med.upenn.edu/cci/milonelab/
4.https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30030295
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